Morfologia de folículos secundários caprinos cultivados in vitro em diferentes concentrações do extrato da fumaça de cigarro

Resumo

A compreensão aprofundada sobre os mecanismos pelos quais a exposição aos compostos da fumaça de cigarro prejudica as células ovarianas é importante para o desenvolvimento de estratégias de prevenção dos danos associados ao tabagismo. Este estudo objetiva avaliar a morfologia e a formação de antro de folículos ovarianos secundários caprinos - sendo esta espécie escolhida devido à semelhança biológica com os humanos, apresentando-se como melhor opção de modelo experimental (Rodrigues, A. et al. Acta Veterinaria Brasilica, 8:284-291, 2014) - cultivados na presença de diferentes concentrações de extrato da fumaça de cigarro (EFC). A avaliação do antro é usada como parâmetro de viabilidade folicular, pois representa transição do estágio pré-antral para o antral, de desenvolvimento. (de Figueiredo JR, et al., Animal Reproduction, 1:7, 2024). Ovários foram coletados em abatedouro local e utilizado de acordo com a Legislação Brasileira para cuidado e uso de animais em atividades de pesquisa científica. O preparo do EFC seguiu protocolo proposto por GelLner (Gellner et al., Current Protocols in Neuroscience, 77:9.54.1-9.54.10, 2016). O meio de base foi α-MEM suplementado com ITS, piruvato, glutamina, hipoxantina, albumina sérica bovina e ácido ascórbico, denominado α-MEM+. Folículos secundários (± 200 µm) (n=24) foram obtidos de ovários de cabras adultas e cíclicas, através da microdissecção. Os folículos foram cultivados individualmente na ausência (α-MEM+; n=8) ou presença de EFC em concentrações de 2,5% (n=8) e 5% (n=8). Foram utilizadas gotas de 100 µl de meio, em placas de petri, sob óleo mineral, sendo troca de 60µl realizada a cada 2 dias. Cultivo realizado por 7 dias em uma incubadora a 39ºC e 5% de CO. Fotografias dos folículos foram obtidas nos dias 0, 2, 4, 6 e 7 de cultivo, utilizando a HAYEAR USB Microscope Camera acoplada a estereomicroscópio para posterior análises. Foram considerados morfologicamente anormais folículos com oócito picnótico, extrusão oocitária ou desorganização das células da granulosa. O antro foi considerado quando houve o surgimento de cavidade repleta de líquido. Foram realizadas duas repetições. Os resultados a seguir são descritivos, tendo em vista que estão em andamento três repetições previstas para a análise estatística. As taxas de folículos morfologicamente normais após 7 dias de cultivo foram de 100% para os tratamentos  α-MEM+ (16/16) e EFC 5% (15/15) e 87,5% para grupo EFC 2,5% (14/16). A extrusão folicular foi o único parâmetro de anormalidade morfológica observada apenas no tratamento 2,5% (D2: 6,25% - 1/16; D4: 12,5% - 2/16). O aparecimento da cavidade antral iniciou no D2 em todos os tratamentos ( α-MEM+: 6,25% - 1/16; EFC 2,5%: 18,75% - 3/16; EFC 5%: 13,33% - 2/15). No D7, a taxa de formação de antro representou 50% (8/16), 43,75% (7/16) e 53,33% (8/15) para os tratamentos α-MEM+, EFC 2,5% e EFC 5%, respectivamente. Dados preliminares concluem que não houve influência do EFC sobre a morfologia folicular e formação de antro de folículos secundários caprinos cultivados in vitro.