Diâmetro de oócitos oriundos de folículos secundários caprinos cultivados in vitro na presença do extrato da fumaça de cigarro

Resumo

A fertilidade de mulheres fumantes é diretamente afetada, visto que influencia na ocorrência de câncer na cérvix e ovário, menopausa precoce e diminuição na fertilidade. Mesmo diante de estudos que atestem a agressividade dos componentes da fumaça de cigarro em relação ao sistema reprodutor feminino, ainda não se conhece exatamente o mecanismo que causa esses efeitos deletérios. Este estudo objetivou avaliar o impacto do extrato da fumaça de cigarro (EFC) no diâmetro de oócitos de folículos secundários cultivados na presença do EFC. Ovários foram coletados em abatedouro local e a sua utilização está de acordo com a Legislação Brasileira para cuidado e uso de animais em atividades de pesquisa científica. O preparo do EFC seguiu o protocolo proposto por Gellner (Gellner et al., Current Protocols in Neuroscience, 77:9.54.1-9.54.10, 2016). O meio de base foi o α-MEM suplementado com ITS, piruvato, glutamina, hipoxantina, de albumina sérica bovina e ácido ascórbico, sendo denominado α-MEM+. Folículos secundários (± 200 µm) (n=24) foram obtidos de ovários de cabras adultas e cíclicas, através da microdissecção. Os folículos foram cultivados individualmente na ausência (α-MEM+; n=8) ou presença de EFC em concentrações de 2,5% (n=8) e 5% (n=8). Foram utilizadas gotas de 100 µl de meio, em placas de petri, sob óleo mineral, sendo a troca de 60µl realizada a cada 2 dias. O cultivo foi realizado por 7 dias em uma incubadora a 39ºC e 5% de CO. Fotografias dos óocitos foram obtidas nos dias 0 e 7 de cultivo, utilizando a HAYEAR USB Microscope Camera acoplada a estereomicroscópio para posterior análises. O diâmetro oócitário foi obtido pela média de duas medidas perpendiculares no programa AxioVision®. Os dados foram analisados utilizando o programa GraphPad Prism®. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média (SEM) e submetidos à análise de variância (ANOVA), seguido de teste de Tukey, considerando-se significativo P<0,05. No D0 não houve diferença significativa no diâmetro oócitário entre os tratamentos avaliados (α-MEM+: 26,92 ± 0,70; 2,5%: 28,10 ± 0,84; 5,0%: 28,14 ± 0,54)(p>0,5). O mesmo comportamento foi observado quando os tratamentos foram comparados no D7 (α-MEM+: 70,48 ± 3,50; 2,5%: 74,52 ± 3,73; 5,0%: 78,91 ± 4,31)(p>0,5). Foram observados diâmetros oocitários significativamente superiores no D7 quando comparado ao D0 em todos os tratamentos avaliados (p<0,05). Pode-se concluir que a exposição ao extrato da fumaça de cigarro não afeta o crescimento dos oócitos em caprinos nas concentrações de 2,5% e 5% cultivadas durante 7 dias.