Influência do extrato da fumaça do cigarro sobre funções de neutrófilos humanos

Resumo

Introdução: Neutrófilos são células do sistema imunológico essenciais na defesa contra infecções, um de seus mecanismos para tal é a formação de estruturas chamadas NETs (Neutrophil Extracellular Traps) que aprisionam e destroem patógenos. A fumaça do cigarro, composta por uma complexa mistura de radicais livres e substâncias químicas tóxicas, tem sido amplamente relacionada à indução de NETs. A presença da fumaça não apenas amplifica a resposta inflamatória, mas também contribui para o estresse oxidativo e danos teciduais, exacerbando condições inflamatórias e pulmonares. Objetivo: Avaliar se o extrato da fumaça do cigarro (EFC) interfere na liberação de NETs de neutrófilos humanos. Materiais e métodos: A pesquisa foi aprovada pelo CEP, parecer 5.998.798, e realizada na UFERSA e UERN. O sangue periférico de indivíduos saudáveis foi submetido ao protocolo de separação de componentes sanguíneos para obtenção dos neutrófilos. Estas células foram expostas às concentrações de 3%, 5% e 10% de EFC (7h, 5% de CO₂) para avaliar a viabilidade celular e às concentrações de 3% e 5% de EFC (7h, 5% de CO₂) para avaliação da liberação de NETs. A viabilidade celular foi avaliada por meio de citometria de fluxo, utilizando-se as sondas Anexina-V e Iodeto de propídeo. As NETs foram analisadas utilizando o Nanodrop. A estatística foi realizada no programa Prism 8.0, considerando dados estatisticamente diferentes com p<0.05. Resultados: As concentrações de 3% e 5% do EFC não interferiram nem na apoptose (3,87% e 9,2%; ), nem na apoptose tardia (1,17% e 0,3%), nem na necrose (0,62% e 0,05%), enquanto a concentração de 10% induziu o processo de apoptose das células (64,22%; p<0.0001). Optou-se por usar as concentrações de 3% e 5% do EFC para avaliar a formação e liberação das NETs. Estas duas concentrações induziram a formação de NETs (3% - 28,13 ±2,1 ng/mL; 5% - 35,88 ±3,4 ng/mL) (p<0,0001). Essa indução de NETs mostrou-se independente de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), já que o uso do difenileno-iodônio (DPI), inibidor da NADPH oxidase, não reduziu a liberação de NETs. Conclusões: As concentrações 3% e 5% de EFC foram capazes de induzir a produção de NETs. A formação das  NETs é independente da produção de ERO pelos neutrófilos.