Diâmetro de folículos ovarianos caprinos cultivados in situ em diferentes concentrações do extrato da fumaça de cigarro

Resumo

Dados da OMS (2021) indicam que 7,8% das mulheres fumam, o que é preocupante, já que o tabagismo afeta a reserva folicular ovariana. Embora se saiba que os componentes do cigarro prejudicam a reprodução, o mecanismo exato que leva à redução folicular é desconhecido. Este estudo teve como objetivo avaliar o impacto do extrato da fumaça de cigarro (EFC) no diâmetro de folículos pré-antrais caprinos cultivados na presença do EFC. Ovários foram coletados em abatedouro local e a sua utilização está de acordo com a Legislação Brasileira para cuidado e uso de animais em atividades de pesquisa científica. O preparo do EFC seguiu o protocolo proposto por Gellner (Gellner et al., Current Protocols in Neuroscience, 77:9.54.1-9.54.10, 2016). O meio de base foi o α-MEM suplementado com ITS (insulina 6,25 µg/mL, transferrina 6,25 µg/mL e selênio 6,25 ng/mL), piruvato a 0,23 mM, glutamina a 2 mM, hipoxantina a 2 mM, e 1,25 mg/mL de albumina sérica bovina (BSA), sendo denominado α-MEM+. Fragmentos (3x3x1 mm) do córtex ovariano (n=5) foram obtidos de ovários de cabras adultas e cíclicas. Dois destes fragmentos foram imediatamente fixados, constituindo o controle fresco (CF) e os demais foram cultivados por 7 dias na ausência (α-MEM+) ou presença de EFC em concentrações de 2,5% e 5% (EFC 2,5% e EFC 5%). Foram realizadas quatro repetições. O cultivo foi realizado em placas de 24 poços, contendo 1 mL de meio, em uma incubadora a 39ºC e 5% de CO₂ em ar. A troca total do meio foi realizada a cada dois dias. Os fragmentos foram fixados em Carnoy por 12 horas e destinados à histologia clássica. Após a inclusão em blocos de parafina, cortes de 7 µm foram seriados e cada quinta secção foi montada em lâmina e corada pelo método do ácido periódico de Schiff-hematoxilina. Somente folículos contendo oócitos com o núcleo visível foram classificados como normais e analisados. O diâmetro folicular foi obtido pela média de duas medidas perpendiculares do folículo no programa AxioVision®. Os dados foram analisados utilizando o programa GraphPad Prism®. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média (SEM) e submetidos à análise de variância (ANOVA), seguido de teste de Tukey, considerando-se significativo P<0,05. Não houve diferença significativa entre os tratamentos CF (CF: 28,48 ± 0,48) e α-MEM+ (26,46 ± 0,75), P> 0,05. Houve redução significativa no diâmetro dos folículos pré-antrais cultivados na presença de EFC (2,5%: 15,21 ± 1,58; 5%: 18,13 ± 0,84) quando comparado ao (CF: 28,48 ± 0,48) e ao α-MEM+ (26,46 ± 0,75), P< 0,0001. Este estudo mostrou que o EFC reduz significativamente o diâmetro folicular médio caprino nas concentrações de 2,5% e 5% após 7 dias de cultivo, indicando um efeito adverso da fumaça do cigarro sobre a reserva folicular.